〔作者簡介〕 和占龍，1972 年生，研究員，教授，云南省技術(shù)創(chuàng)新人才，國家自然科學(xué)基金評審專家?guī)臁�國家教育部及云南省、昆明市�?shí)驗(yàn)動(dòng)物專家?guī)斐蓡T，云南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)副秘書長。長期從事醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及人類疾病靈長類動(dòng)物模型的開發(fā)及應(yīng)用研究，現(xiàn)任中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所全國醫(yī)學(xué)靈長類中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部主任。作為主要研究人員參加國家科技部 (863)項(xiàng)目、國家科技重大專項(xiàng)、國家及省級(jí)自然基金資助項(xiàng)目等 10 余項(xiàng)，獲得云南省科技進(jìn)步一等獎(jiǎng) 1 項(xiàng)、昆明市科技進(jìn)步一等獎(jiǎng) 1 項(xiàng)，云南省科技進(jìn)步三等獎(jiǎng) 4 項(xiàng)，中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技一等獎(jiǎng)、二等獎(jiǎng)各 1 項(xiàng)，專利及軟件著作權(quán) 6 項(xiàng)，發(fā)表論文 90 余篇;其中 SCI 論文 27 篇，第一(通訊)作者 8 篇;參編《實(shí)驗(yàn)猴正常組織學(xué)圖譜》和《恒河猴組織學(xué)》專著 2 部，參與制訂云南省《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病理學(xué)檢測》地方標(biāo)準(zhǔn) 1 部。完成 EV71、輪狀病毒、流感、糖尿病、帕金森病、老年癡呆等動(dòng)物模型建立、疫苗研發(fā)和免疫原性等評價(jià)工作。主要研究方向?yàn)槿祟惣膊〉撵`長類動(dòng)物模型建立、評價(jià)與比較醫(yī)學(xué)研究。

　　單純皰疹病毒( herpes simplex virus，HSV) 屬致病性人類 α 皰疹病毒，能引起齦口炎、角膜結(jié)膜、腦炎以及生殖系統(tǒng)感染和新生兒的感染等多種疾病。 HSV 包 括 2 個(gè) 血 清 型: Ⅰ 型 ( HSV - 1 ) 和 Ⅱ 型 (HSV - 2)，可以在三叉及骶尾神經(jīng)節(jié)等組織內(nèi)建立終身潛伏狀態(tài)，并且周期性復(fù)活而引起疾病復(fù)發(fā)[1]。感染 HSV - 1 主要引起口唇及顏面、腰部以上的部位感染;感染 HSV - 2 者 80% 以上引起生殖系統(tǒng)感染，主要通過性傳播。全球 HSV - 1 的感染率約為 90% ，其中美國約為 65% ，歐洲為 52% ～ 67% ;HSV - 2 感染比 HSV - 1 感 染 少，在美國和歐洲的感染率為 10% ～ 20%[2，3]。盡管現(xiàn)有的抗病毒干預(yù)手段可以在一定程度上控制病情和傳播，但無法從根本上治愈，亟待有效的疫苗來限制 HSV 病毒的感染、傳播及復(fù)發(fā)。

　　一、疫苗的研究現(xiàn)狀

　　作為一種理想的 HSV 疫苗，應(yīng)該可以誘發(fā)消除性免疫，亦即在 HSV 侵入人類機(jī)體的各種途徑如生殖道、口鼻黏膜等時(shí)都能夠誘發(fā)有效的免疫應(yīng)答，并對病毒的再感染具有抵抗力。自 20 世紀(jì) 20 年代開始，HSV - 1 和 HSV - 2 疫苗已經(jīng)開始在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行研究，但其有效性并沒有得到證實(shí)[4]。最近的 30 年里，隨著免疫學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，有了更多新的手段來研制新型 HSV 疫苗。比如近年來就有研究人員把目光放在關(guān)注感染與非感染者間 T 細(xì)胞識(shí)別位點(diǎn)是否具有差異性，因?yàn)檫@與病毒的反復(fù)暴發(fā)密切相關(guān)[5]。目前研究較多且經(jīng)過臨床評估的疫苗主要有亞單位疫苗( subunit vaccine)、減毒活疫苗 (attenuated live virus vaccine)、復(fù) 制 缺 陷 病 毒 疫 苗 (replication defective virus vaccine)、DNA 疫苗(DNA vaccine)以及載體疫苗( vector vaccine)，這些疫苗在不斷建立起來的動(dòng)物模型上取得重要的成效，但各有優(yōu)缺點(diǎn)[6]。

　　1. 亞單位疫苗:研究重點(diǎn)主要集中在病毒進(jìn)入細(xì)胞所必須的糖蛋白 gB 和 gD 上，在已感染 HSV 的患者體內(nèi)，它們主要激活 CD4 + T 細(xì)胞，誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫。目前較為普遍并且已經(jīng)進(jìn)入Ⅲ期臨床的是由 GlaxoSmithKline 公 司 生 產(chǎn) 的 gD2 - 硫 酸 鋁鉀 - 3dMPL 疫苗，所用佐劑 3 - dMPL(3 - O 脫酰單磷酸脂質(zhì) A)能夠增強(qiáng) Th1 應(yīng)答，雖然可以明顯減輕首次感染 HSV - 2 的癥狀，但該結(jié)果僅限于 HSV - 1 和 HSV - 2 血清學(xué)反應(yīng)均屬陰性的女性中[7]。

　　2. 減毒活疫苗:具有多種抗原物質(zhì)和表位，可以誘發(fā) Th1 免疫并且在男性和女性中均有治療活性，對復(fù)發(fā)疾病可達(dá)到 44% 的保護(hù)率，同時(shí)也降低了復(fù)發(fā)的頻率與嚴(yán)重程度，產(chǎn)生長效持久的保護(hù)作用，但隱患也較多，存在毒力返祖的風(fēng)險(xiǎn)，某些 HSV 基因還存在致癌的可能性[8，9]。

　　3. 載體疫苗:兼具了減毒活疫苗和亞單位疫苗的優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)能避免 HSV 的毒性、潛伏性以及致癌性等問題。在免疫接種時(shí)，以病毒或細(xì)菌作為載體的疫苗表達(dá)具有免疫原性的蛋白，并且相關(guān)基因編碼產(chǎn)物能誘導(dǎo)廣泛的體液免疫和細(xì)胞免疫[10]。

　　4. DNA 疫苗:主要是將病毒的編碼基因插入到質(zhì)粒 DNA 中，然后直接接種于體內(nèi)。在目前沒有行之有效的疫苗可以和 HSV 病毒相拮抗時(shí)，該種疫苗受到了高度重視，它能夠在宿主體內(nèi)表達(dá)相應(yīng)的病毒蛋白從而誘發(fā)多個(gè)抗原表位，其中包括不會(huì)發(fā)生抗原漂移的保守性抗原表位，在接種宿主體內(nèi)連續(xù)表達(dá)多個(gè)多肽時(shí)，還能模擬減毒活疫苗的效應(yīng)，直接刺激抗原遞呈細(xì)胞，尤其是樹狀突細(xì)胞(DC)[11，12]。盡管 DNA 疫苗具有活載體免疫的某些優(yōu)點(diǎn)，能克服由非復(fù)制性抗原所誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫效果較低等難題，但外源基因進(jìn)入機(jī)體內(nèi)會(huì)不會(huì)與宿主基因發(fā)生整合還有待進(jìn)一步的研究證實(shí)。

　　5. 復(fù)制缺陷病毒疫苗:缺乏對病毒基因組復(fù)制、合成以及病毒顆粒裝配必要的一個(gè)或多個(gè)功能，在正常細(xì)胞中由于復(fù)制的部分過程受阻并不產(chǎn)生子代病毒，但卻正常表達(dá)基因產(chǎn)物，因此可充分利用 MHCⅠ 類和Ⅱ類的抗原遞呈作用，已經(jīng)研發(fā)此類疫苗能夠有效減輕病毒脫落、減少病毒在神經(jīng)節(jié)的裝載量、誘發(fā)病毒特異性 CD8 + T 細(xì)胞、有效地保護(hù)動(dòng)物免于急性病毒攻擊，但在臨床中的表現(xiàn)卻不盡如人意，尤其是在Ⅱ期臨床中。

　　二、存在的問題與展望

　　面對這樣的局面，哈欽森癌癥研究中心在 2012 年的一個(gè)最近的獨(dú)特研究認(rèn)識(shí)到一個(gè)治療單純性皰疹病毒疫苗失敗的主要原因是當(dāng)前疫苗策略大多集中在復(fù)制病毒、蛋白質(zhì)或 DNA，而未看重根除潛伏的整合性或非復(fù)制的附加型病毒基因組。該研究還關(guān)注到內(nèi)切酶可以清除隱藏的整合在體內(nèi)的病毒基因組，這些酶被工程化擁有高度精確性，這樣在關(guān)鍵位置結(jié)合不會(huì)有任何錯(cuò)誤，而不精確的非同源末端加入 (NHEJ)修復(fù)，在重復(fù)清除的位置同時(shí)進(jìn)行可以破壞的重要病毒蛋白。同時(shí)載有不同的 DNA 清除酶，鋅指內(nèi)切酶，轉(zhuǎn)錄激活樣(TAL)內(nèi)切酶(TALENs)和歸巢內(nèi)切酶的傳遞等都尚在研究之中[13]。同時(shí)，另一項(xiàng)研究也密切關(guān)注潛伏病毒基因組，他們最近將陽離子油脂抗原(Vaxfectin)在鼠模型中表達(dá) gD2:40% 的小鼠 接 種 這 種 Vaxfectin - gD2pDNA 沒 有 檢 測 到 HSV - 2 病毒基因組。而另一個(gè)新關(guān)注的策略是細(xì)胞介導(dǎo)的對病毒蛋白的反應(yīng)。許多新研究共同繼續(xù)關(guān)注 HSV - 1 的包膜糖蛋白和 HSV - 2 產(chǎn)生的細(xì)胞反應(yīng)。比薩大學(xué)最近的一項(xiàng)研究通過貓免疫缺陷病毒(fip)載體用老鼠來測試 gB1 疫苗。疫苗誘導(dǎo)交叉中和抗體激活，以及細(xì)胞介導(dǎo)的反應(yīng)，保護(hù) 100% 和 75% 的老鼠不受 HSV - 1 和 HSV - 2 感染[14]。最近瑞典進(jìn)行的一項(xiàng)研究顯示，糖蛋白 G 結(jié)合輔助 CpG，可能是一個(gè)有前途的疫苗抗原。這些小鼠的血清顯示巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的，抗體依賴性細(xì)胞毒性和抗體依賴性補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞溶解。這種保護(hù)是由脾 CD4 + T 細(xì)胞在體外與抗原引發(fā)刺激 γ 干擾素(IFN - γ)響應(yīng)產(chǎn)生，同時(shí)也顯示這種 IFN - γ 反應(yīng)，這種免疫可以保護(hù) 80% ～ 100% 小鼠免受致命的陰道 HSV - 2 侵襲; 它還減少疾病嚴(yán)重程度和病毒復(fù)制[15]。糖蛋白 B、 C、E、G 的免疫決定性表位肽，gb2466 - 473、gC2216 - 223、gE2483 - 491、gG2572 - 579、gI2286 - 295 和 HSV - 2，分別被證明可以刺激小鼠產(chǎn)生抗體，在體外中和 HSV - 2 [16]。南京醫(yī)科大學(xué)研制的 CJ2 - gD2，是一類表達(dá) gD2 的新的復(fù)制 - 缺陷型病毒性疫苗，展現(xiàn)了臨床前免疫原性，能夠誘發(fā)強(qiáng) HSV - 2 - 特異的記憶 CD4 + 和 CD8 + T 細(xì)胞反應(yīng)。gD2 的表達(dá)與野生型 HSV - 2 感染的效率相近，能夠使得同時(shí)感染 CJ2 - gD2 的細(xì)胞，野生型 HSV - 2 病毒復(fù)制下降 150 倍，與野生型 HSV - 2 的感染的多樣性相同[17]。另一種更新的方法涉及一個(gè)候選疫苗(稱 HerpV)由 32 個(gè)合 成 的 35merHSV - 2 肽非共價(jià)地與重組人類 Hsc70 蛋白質(zhì)混合組成。這些肽代表 22 個(gè)與 HSV - 2 病毒復(fù)制有關(guān)的蛋白。最近總結(jié)的第一階段研究設(shè)有 4 個(gè)組: HerpV + 皂素佐劑(QS - 21)、HerpV、 QS - 21、空載。HSV - 2 陽性組參與者注射了 HerpV + QS - 21 后 CD4 + 和 CD8 + T 細(xì)胞顯示出很強(qiáng)的對 HSV - 2 抗原反應(yīng)。HSV - 2 + 參與者可以通過注射肽鏈型疫苗獲得一個(gè)廣泛的 CD4 + 和 CD8 + T 細(xì)胞反應(yīng)[18]。這些最新的研究結(jié)果雖然還沒有得到最終的臨床驗(yàn)證，但還是非常令人鼓舞的。

　　相關(guān)期刊推薦：《中國疫苗和免疫》(雙月刊)創(chuàng)刊于1995年，由中國疾病控制中心(原中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院)和衛(wèi)生部疾病控制司聯(lián)合主辦。主要設(shè)有：述評、論著、管理、經(jīng)驗(yàn)交流、短篇報(bào)道、綜述、講座、學(xué)術(shù)報(bào)告、學(xué)術(shù)討論、專家訪談、文摘和信息等欄目。有投稿需求的，可以直接與期刊天空在線編輯聯(lián)系。

　　疫苗的最佳保護(hù)需要增強(qiáng)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)和體液免疫來抵抗病毒。幾十年來，在 HSV - 1 和 HSV - 2 疫苗的發(fā)展歷史上，有疫苗研發(fā)進(jìn)展到Ⅲ期臨床試驗(yàn)，但結(jié)果卻沒有像在小鼠和其他模式生物身上那么有效，所以未來研究的方向應(yīng)該是揭示 T 細(xì)胞對 HSV 表位的反應(yīng)規(guī)律。與 此 同 時(shí)，動(dòng) 物 模 型 是 HSV 治療性疫苗研發(fā)的關(guān)鍵，目前用于 HSV 研究的動(dòng)物模型主要有小鼠、兔子和豚鼠，均與人體的免疫體系有著較大的差異，比如小鼠模型是不能模擬人類感染 HSV 并潛伏后的自發(fā)性和周期性復(fù)發(fā)疾病，所以才導(dǎo)致了在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)上表現(xiàn)良好的候選疫苗在臨床實(shí)驗(yàn)中遭遇滑鐵盧[19]。因此，建立更加接近人體免疫特征的非人靈長類動(dòng)物模型也將是開發(fā) HSV 疫苗的重要研究方向。