發(fā)布時間：2020-03-23所屬分類：醫(yī)學職稱論文瀏覽：1次
摘 要： 摘要：目的分析四角蛤蜊醇沉上清中脂肪酸及甾醇類成分。方法采用氣相色譜一質(zhì)譜(GCMS)聯(lián)用技術(shù)對四角蛤蜊醇沉上清中脂肪酸類、甾醇類成分進行分析與鑒定。結(jié)果共分離鑒定出35種脂肪酸，占總脂肪酸含量的97.74%，其中17種飽和脂肪酸的相對含量為54.52，主要為
摘要：目的分析四角蛤蜊醇沉上清中脂肪酸及甾醇類成分。方法采用氣相色譜一質(zhì)譜(GC—MS)聯(lián)用技術(shù)對四角蛤蜊醇沉上清中脂肪酸類、甾醇類成分進行分析與鑒定。結(jié)果共分離鑒定出35種脂肪酸，占總脂肪酸含量的97.74%，其中17種飽和脂肪酸的相對含量為54.52，主要為十六烷酸、十八烷酸等;18種不飽和脂肪酸的相對含量為43.22，主要為9一十六烯酸、6一十四烯酸、EPA等。共分離鑒定出1O種甾醇，包括3種膽甾醇、3種麥角甾醇、2種豆甾醇、巖甾醇及雄甾醇各1種，其中膽甾醇含量最高為63.38，其次為麥角甾醇2O.8l與豆甾醇9.68。結(jié)論以GC—MS聯(lián)用技術(shù)分析了四角蛤蜊醇沉上清中的脂肪酸類、甾醇類成分，為四角蛤蜊資源的綜合開發(fā)利用提供科學依據(jù)。
關(guān)鍵詞：四角蛤蜊;醇沉上清;脂肪酸;甾醇;GC—MS
四角蛤蜊(Mactraveneriformis)屬于軟體動物門(Mollusca)，瓣鰓綱(Lamellibranchia)，真瓣鰓目(Eularnellibranchia)蛤蜊科(Mactridae)，是一種廣泛分布于我國南北各海區(qū)的較大型低值經(jīng)濟貝類。其貝殼和軟體部分在中醫(yī)理論中均有記載可藥用，明·李時珍《本草綱目》記載：蛤蜊肉“止消渴，開胃，治老癖，能為寒熱及婦人血塊”。現(xiàn)代研究表明四角蛤蜊具有免疫調(diào)節(jié)、輔助降低血糖、抗氧化等功效，這與四角蛤蜊物質(zhì)基礎(chǔ)緊密相關(guān)，目前已報道蛤蜊中含有多糖類、蛋白質(zhì)類、氨基酸類、脂類等物質(zhì)一。
本課題組前期對四角蛤蜊提取物進行醇沉沉淀，沉淀部位具有免疫調(diào)節(jié)及輔助降血糖功能，其主要含有多糖類成分n]。醇沉上清部位具有較好的抗氧化作用，而其抗氧化功效物質(zhì)基礎(chǔ)仍不明確。現(xiàn)有的研究報道表明海洋軟體貝類中含有豐富的不飽和脂肪酸類物質(zhì)，如二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)等，這些物質(zhì)具有降低血中膽固醇、促進細胞生長發(fā)育、提高學習記憶能力、預(yù)防老年癡呆等作用]。本文采用GC—MS聯(lián)用技術(shù)，對四角蛤蜊醇沉上清提取物的脂肪酸類及甾醇類物質(zhì)組成進行了分析鑒定，為綜合開發(fā)利用四角蛤蜊資源提供科學依據(jù)。
1材料
1.1四角蛤蜊提取物
四角蛤蜊水提醇沉上清液浸膏，實驗室制備獲得_4]，四角蛤蜊由江蘇省海洋水產(chǎn)研究所提供，批號：20100706，經(jīng)江蘇省海洋水產(chǎn)研究所萬夕和研究員鑒定為蛤蜊科動物四角蛤蜊(Mactravenerifor一isReeve)。
1.2實驗試劑
三氯甲烷(中國醫(yī)藥集團上海化學試劑公司，批號：20010306);色譜甲醇(國藥集團化學試劑有限公司，批號：F20080215)，三氟化硼乙醚(南京凱基生物科技發(fā)展有限公司，批號：0411S05);正己烷(南京化學試劑廠批號：0628S04);其余試劑為國產(chǎn)分析純。1.3實驗儀器FA1104型電子分析天平(上海精密科學儀器有限公司);組織絞碎機(廣東南海德豐電熱設(shè)備廠);725BASIC高速勻漿機(IKA公司);電熱恒溫干燥箱202型(上海索譜儀器有限公司);HH一4數(shù)顯恒溫水浴鍋(自華電器有限公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(BUCHIRotavaporR114);80～2B型臺式離心機(上海安亭科學儀器廠制造);Agilent5975型GC—MS氣質(zhì)聯(lián)用儀。
2方法與結(jié)果
2.1石油醚萃取法萃取脂肪酸
稱取8.15g四角蛤蜊醇沉上清的真空干燥樣品，用水溶解，置于分液漏斗中，分別加入9次1000mL石油醚，合并萃取液，減壓濃縮除去石油醚得浸膏，為石油醚萃取部位。6O℃真空干燥后，加入一定體積的甲醇一三氯甲烷一水混合溶液(體積比為2：1：0.8)，電磁攪拌下室溫過夜，離心分離提取液，加入一定量的三氯甲烷和水，使提取液的最終濃度保持為甲醇：三氯甲烷：水一1：1：0.5(v/v)，分離有機相，真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機溶劑得油狀物。
2.2脂肪酸萃取物的甲脂化
取適量“2.1”項下萃取獲得的脂肪酸置于10mL的具塞試管中，分別依次加入1O%的KOH一南京中醫(yī)藥大學學報2012年7月第28卷第4期MeOH溶液2mL，在6O℃條件下皂化30min，待油珠完全消失后，冷卻，加入2mL三氟化硼乙醚一甲醇(三氟化硼乙醚：甲醇一1：3，V/V)溶液并于60℃水浴甲酯化30min，冷卻后，加正己烷4mL，離心分層，取上清加等體積的水，洗至有機層呈中性。加無水硫酸鈉靜置過夜，過濾加正己烷復溶，進行GC—MS分析。
2.3甾醇的提取
取適量“2.1”項下油狀物置于1OmL的具塞試管中，分別依次加入1O的KOH水溶液5mL，在60℃條件下皂化30min。冷卻后用乙醚萃取3次，每次5mL。合并乙醚萃取液，再用水洗3次，每次10mL。取乙醚層加無水硫酸鈉適量，靜置過夜。去上層乙醚層3O℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得黃色固體。加適量無水乙醇復溶，靜置析晶。取晶體加正己烷復溶，進行GC—MS分析。
2.4GC—MS分析
2.4.1氣相條件
色譜柱AgilentHP一5，石英毛細管色譜柱(o.25mm×3Om，0.25m);進樣口溫度200℃，檢測器溫度250℃;程序升溫：初始溫度180℃，保持40min，以5℃/rain的速率升溫至200℃保持10min，以2℃/min的速率升溫至210℃保持2Omin，進樣量：1L;載氣為氦氣，流速為1.0mL/min。2.4.2質(zhì)譜條件
EI離子源，電離電壓70eV，離子源溫度220℃，加速電壓200eV;掃描質(zhì)量rn/z35～550。
2。5結(jié)果
按照上述條件對四角蛤蜊醇沉上清中脂肪酸及甾醇進行分析，分別得到脂肪酸及甾醇的GC—MS總離子流圖，見圖1～2。根據(jù)圖中各組分的離子碎片質(zhì)量譜圖，通過檢索NIST譜圖庫并參考標準質(zhì)譜譜圖，從中確定了35種脂肪酸及10種甾醇類物質(zhì)。運用峰面積歸一化法，測得各化學成分的相對百分含量。結(jié)果見表1～2。
從表1中看出，四角蛤蜊醇沉上清中含有年富的脂肪酸類成分，其中飽和脂肪酸17種，占脂肪酸總量的54.52，以十六烷酸(38.86)、十八烷酸(6.80)等為主;不飽和脂肪酸18種，占脂肪酸總量的43.22，以9一十六烯酸(12.20)、6一十四烯酸(6.41)、EPA(5.21)等為主。從表2中看出，四角蛤蜊醇沉上清中檢測出10種甾醇，包括3種膽甾醇、3種麥角甾醇、2種豆甾醇、1種巖甾醇及1種雄甾醇。其中膽甾醇含量最高為63.38，其次為麥角甾醇20.81，豆甾醇含有9.68。
3討論
EPA和DHA作為重要的多不飽和脂肪酸，在營養(yǎng)和醫(yī)學領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用，如EPA被稱為是“血管清道夫”，可使血液黏度降低，紅細胞可塑性增加，從而改善冠狀動脈血液循環(huán)，具有疏導清理心臟血管的作用，DHA能抑止腦細胞老化，活化腦細胞，是大腦細胞形成發(fā)育及運作不可缺少的物質(zhì)基礎(chǔ)，具有補腦健腦的作用。
此外，四角蛤蜊醇沉上清中還含有甾醇類物質(zhì)，甾醇是所有真核生物細胞膜的主要成分，它們的結(jié)構(gòu)特征諸如烷基側(cè)鏈、內(nèi)部甲基化及雙鍵位置在化學分類學上具有重要意義[5]。傳統(tǒng)理論認為麥角甾醇一般存在于真菌中，豆甾醇存在于植物中，而我們在四角蛤蜊醇沉上清中檢出了麥角甾醇與豆甾醇，在四角蛤蜊組織中鑒定豆甾醇是首次報道，這可能與貝類生長環(huán)境和攝食種類有關(guān)。這些甾醇類化合物具有廣泛的生理活性，如豆甾醇能有效降低血清中膽固醇的濃度;巖藻甾醇對保持生物內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、控制糖原和礦物質(zhì)的代謝、調(diào)節(jié)應(yīng)激反應(yīng)等方面有重要作用_6]。
四角蛤蜊醇沉上清具有良好的抗氧化作用，能夠清除自由基，升高機體SOD、GsH、CAT等抗氧化酶的活性，本文通過GS—MS對四角蛤蜊醇沉上清中的脂肪酸類、甾醇類物質(zhì)進行了分析鑒定，探討四角蛤蜊醇沉上清抗氧化活性的功效物質(zhì)基礎(chǔ)，為進一步深入開發(fā)四角蛤蜊以及江蘇沿海豐富的低值貝類資源提供科學依據(jù)。
期刊推薦：《中藥藥理與臨床》是中國藥理學會主辦、中國藥理學會中藥藥理專業(yè)委員會具體承辦的中藥藥理學專門學術(shù)刊物，創(chuàng)刊于1985年，歷屆主編、常務(wù)副主編都是中國藥理學會/中藥藥理專業(yè)委員會主要負責人。主要刊載中藥藥理學基礎(chǔ)和應(yīng)用基礎(chǔ)研究論文，也刊載天然產(chǎn)物基礎(chǔ)與開發(fā)研究論文，辟“名方研究”、“實驗研究”、“臨床研究”、“思路與方法學探討”、“綜述”等主要欄目，載文數(shù)量每期約35～40篇，其中各種基金資助的研究課題所撰寫的學術(shù)論文約占1/3。
